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SPR系統(tǒng)產(chǎn)生的空間成像面積隨著時間推移
      
  劍橋顧問有限公司(英國劍橋)開發(fā)的SPR系統(tǒng),提供改善SPR測量?;谙辔徊?,該系統(tǒng)產(chǎn)生的樣本空間成像面積隨著時間的推移。結(jié)合動力學(xué)與Flexchip的SPRimager II系統(tǒng)中,可以觀察到了一個區(qū)域。涉及表面的相互作用的動力學(xué)作為一個例子,示出的移動的結(jié)合水平的金表面以及一個橢圓形的底部。
  劍橋顧問系統(tǒng)采用了單片式結(jié)構(gòu),以限制振動的干擾(參見圖3)的干涉儀。黃金表面有兩個照明區(qū)域:左側(cè)區(qū)域是光參考區(qū),右邊是樣本區(qū)域。參考區(qū)域是用相同的緩沖溶液作為樣品區(qū),但沒有相關(guān)的化學(xué)淹沒。整個實驗過程中,以減少熱漂移,這兩個區(qū)域都保持在相同的溫度。
  干涉條紋字段被捕獲在選擇的時間間隔,并在頻域上的傅立葉方法處理,得到樣本區(qū)域的參考區(qū)相對折射指數(shù)的輕微變化。圖4顯示了一個示例附帶字段和一個產(chǎn)生的空間圖像的特異性和非特異性抗體結(jié)合的樣本區(qū)域。為了詢問同時兩種抗體的樣品區(qū)域被劃分為兩個橢圓形而不是一個井。實際上是夸大了的入射角以同樣的方式,查看一個圓傾斜使得它出現(xiàn)橢圓孔的縱橫比。同樣,圓形準(zhǔn)直照明形成一個橢圓形的樣品區(qū),這些實驗為約3.5×6毫米。
  已經(jīng)證明該系統(tǒng)使用兩個挑戰(zhàn)各孔中相同的蛋白質(zhì)的抗體結(jié)合的差。在左方的抗體以及抗-HA的抗原表位特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)上的暴露的頂。相反,一個不匹配的抗體,cMyc,不綁定的抗原表位,并顯示小差分信號。
  的圖像區(qū)域中包含兩個橢圓形井之間的控制區(qū)域,這是實現(xiàn)由聚二甲基硅氧烷掩模??刂茀^(qū)域進(jìn)行監(jiān)視,以提供一個直流校正,占熱漂移。橢圓形井發(fā)生約束力的位置顯示出減少的折射率。這對應(yīng)于一個本地由于各孔中的蛋白結(jié)合的抗體,在金表面上的厚度增加。
  這種變化的幅度表示的結(jié)合量。井反復(fù)洗滌的緩沖液,以除去任何非特異性結(jié)合的分子,這是監(jiān)測特異性結(jié)合的材料,制得最終的水平。圖5示出了三個合適的圖像區(qū)域的直流校正信號的平均:在左邊以及,參考區(qū)域在兩者之間,以及右側(cè)。與匹配的蛋白質(zhì)的最終結(jié)合的抗體水平的幅度是明顯的不同的電平與非匹配蛋白的抗體。其結(jié)果是辨別能力的蛋白質(zhì),它包含的抗體的結(jié)合位點。
  系統(tǒng)的另一個例子的空間特征表現(xiàn)出半抗原:蛋白質(zhì)相互作用的樣本區(qū)域的右半部分上圖案化使用生物素陣列。與液體的整個覆蓋范圍,綁定發(fā)生用親和陣列中的的三重峰。在圖7中的兩個例子,是協(xié)會解離曲線,表明數(shù)組元素之間的結(jié)合親和力的差異。
  相位成像此SPR安排??的功能,可以用于檢測樣品流動的暴露區(qū)域上的點陣列中的綁定事件。此功能也可用于監(jiān)測結(jié)合在單獨的信道配置在微通道陣列,每個流具有不同的分析物。許多令人興奮和商業(yè)前景的新興應(yīng)用SPR每年從不同的研究領(lǐng)域。一些例子包括以下內(nèi)容:臨床診斷,生物武器的病原體檢測,蛋白質(zhì)相互作用研究,蛋白質(zhì)表達(dá)分析,蛋白質(zhì) - 藥物相互作用分析,疫苗研制,過敏原的食品安全,抗生素殘留,或病原體的蛋白質(zhì)檢測和化學(xué)檢測污染物。
  面臨的挑戰(zhàn)是重新包裝的SPR系統(tǒng)到一個低成本的,手持式的,潛在的可支配系統(tǒng)從基于實驗室的儀器,而利用基于圖像的方法。兩所大學(xué)的小組開發(fā)基于圖像的方法,使用相位差信興高等工程研究所(香港),成大(臺南市)。在西雅圖華盛頓大學(xué)的研究人員也正在開發(fā)基于SPR測量唾液中的分析物。有競爭力的免疫苯妥英鈉開發(fā)利用戰(zhàn)略石油儲備來衡量不同的處理的預(yù)處理唾液樣本。
  SPR系統(tǒng)的開發(fā)和利用,將繼續(xù)作出貢獻(xiàn)新的體外診斷試劑的出現(xiàn)與高感光度。搜索訪問全球醫(yī)療保健提供商的體外診斷可能會轉(zhuǎn)向使用SPR。在發(fā)達(dá)世界中的實驗室,SPR系統(tǒng)被用來尋找新藥,并更好地了解蛋白質(zhì)相互作用。眾多的SPR系統(tǒng)獲取商業(yè)成熟,導(dǎo)致顯著的醫(yī)療和科學(xué)發(fā)現(xiàn),難以捉摸的等離子體將有更大的影響力超出了以上幾個納米一條細(xì)細(xì)的金層。
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