購買時請注意選擇相應的產品名稱
| 電化學用于凝血酶檢測23在這些配置中 | |||
|---|---|---|---|
|
許多不同的在電化學aptasensors已用于凝血酶檢測23在這些配置中，凝血酶檢測到使用的夾層格式。夾心法格式是僅適用于具有多個適配體結合區域的情況下的目標。凝血酶有兩個的正電性exosites，這兩者都能夠結合特定的適配體。
夾心法進行固定金電極上的自組裝單層硫醇化的適體。隨后孵育電極與凝血酶。在第二次溫育步驟，辣根過氧化物酶（HRP）標記的適配體被允許綁定到其他的凝血酶外部位。HRP標記的適配體，制備生物素標記的適配體與鏈霉親和素-HRP孵育，有效地形成的過氧化物酶標記的適配體。的HRP，從而固定在電極表面上，使用過氧化氫 ??和擴散，鋨的基于介體（輸出端（聯吡啶）2（吡咯-CH 2 -NH 2）] Cl）的電化學測定。在電極上測得的電流相關的凝血酶通過校準的數量（參見圖3）。
適體的凝血酶適體相互作用的優化配置產生的電流為4.5μA。陰性對照驗證該信號不是由于非特異性吸附。陰性對照，無凝血酶固定在電極表面上，導致在電流為1.8μA。第二個陰性對照，無底座的適體，產生一個相同的電流。第三個陰性對照，未經HRP標記的適配體，導致0.2μA的電流（參見圖4）。
報道的電化學響應電流差在-0.1 V（對銀和氯化銀）之前和之后加入6 mM的過氧化氫和鋨的氧化還原介體。擔任過氧化氫的HRP的底物的標簽，以及允許鋨氧化還原介體的酶的轉導成可測量的電流響應的營業額。
雖然這個實驗中遭受顯著的非特異性吸附的HRP標記的適配體，該系統的檢測極限為92納米（參見圖5）。檢出限為測量通過沿著線性回歸直線的線性響應的的電流抗凝血酶值擬合。線的標準偏差的測定和乘以3的假沒有檢測的概率降低至5％。添加該值的信號的值是區別于噪聲響應。
其結果是過氧化物酶標簽，電化學檢測顯示出顯著的背景響應（參見圖4和圖5）。過氧化物酶標簽表現出強烈的非特異性吸附的電化學傳感器。其他的電化學親和傳感器，使用過氧化物酶已觀察到這種效應。過氧化物酶的電化學檢測是非常敏感的，并沒有得到充分的必要條件，以防止在過氧化物酶結合到電極表面。
結論牢固結合和具體的目標以外的明顯的互補序列的寡核苷酸序列的能力允許基于寡核苷酸的檢測策略將用于在新的領域，如治療學，分離技術和生物傳感器。適體的檢測策略中的應用是特別有前途的。
適體提供有效身份證件和生產方法（例如，SELEX）??，簡單的化學合成（例如，自動合成直接分析支持），固定在高密度，檢測所有毒素的可能性，并在非生理條件下的穩定性。事實上，適體可能取代在生物傳感器應用中??的抗體。然而，首先需要匹配的抗體庫，適體生物傳感器。其次，許多現成的開發，優化和解決這些實驗的方法將需要創建適配子之前將很容易通過。
參考文獻
1。?氣賀等人，“適體mRNA的模式具有鮮明的黃嘌呤/鳥嘌呤堿基的嘌呤識別，” 核酸研究 26（1998）：1755年至1760年。
2。中號Sassanfar JW紹斯塔克，“RNA結構結合ATP，” 自然 364（1993）：550-553。
3。LR Paborsky等人，“人凝血酶的單鏈DNA核酸適體結合位點，” 中國生物化學 268（1993）：808-811。
4。RD JENISON等，“高分辨率RNA分子的歧視，” 科學“ 263（1994）：1425年至1434年。
5。慧聰Goicoechea AC Olivieri的，和A穆尼奧斯，人血清中茶堿的測定紫外分光光度法和偏最小二乘（PLS-1）校準“，” 分析化學物理學 384（1999）：95-103。
6。DL羅伯遜和GF喬伊斯“評選，專門切割單鏈DNA的RNA酶在體外，” 自然“ 344（1990）：467-468。
7。S阿格拉瓦爾，C赫里斯托祖，和M的步態，“高效的方法將非放射性的標簽，以合成的寡脫氧核糖核苷酸的5'末端，” 核酸研究 14（1986）：6227-6245。
8。?比澤克等，“推導RNA適體抑制劑的人補體C5，” 免疫藥理學 42（1999）：219-230。
9。Q鄧等人，“保留和親和層析法分離腺苷及類似物與核酸適體的固定相，” 分析化學 73（2001）：5415-5420。
10。RB Kotia李，L，LB McGown，“非目標化合物的分離DNA核酸適體，” 分析化學 72（2000）：827-832。
11。KA戴維斯等人，“使用流式細胞儀的高親和力DNA配體，” 核酸研究 24（1996）：702-706。
12。?康拉德和AD埃林頓，“固定化的蛋白激酶C同工酶檢測RNA適配子，” 分析生物化學 242（1996）：261-265。
13。，L DW Drolet以月亮麥克德莫特，和TS羅米格的，“酶聯寡核苷酸的含量，” 自然生物技術 14，沒有。8（1996）：一○二一年至一零二七年。
14。F Kleinjung等人，“高親和RNA作為識別元素在生物傳感器，” 分析化學 70（1998）：328-331。
15。N濱口，A埃林頓，和M斯坦頓，“直接檢測蛋白質，核酸適體的燈塔” 分析生物化學， 294（2001）：126-131。
16。CA Savran等人，“使用基于適體的受體分子蛋白的微機械的檢測”，分析生物化學（Analytical Biochemistry） 76（2004）：3194-3198。
17。?江等人，“具體的適體的蛋白質相互作用研究的原子力顯微鏡，” 分析化學 75（2003）：2112-2116。
18。MD Schlensog等，“愛波生物傳感器使用核酸為配體，傳感器和執行器，B：化學 101（2004）：308-315。
19。K表池袋，C清原和K SODE的的，“新型電化學傳感器系統的蛋白質，使用適配三明治的方式，” 生物傳感器與生物電子學 20（2005）：2168年至2172年。
20。?許等人免費“的標簽，基于核酸適體陣列檢測，電化學檢測” 分析化學 77（2005）：5107-5113。
21。AE拉迪等，“試劑，可重復使用，超靈敏的電化學分子燈塔Aptasensor的，” 中國的美國化學學會 128（2006）：117-124。
22。BR貝克等人，“電子，基于核酸適配體的小分子傳感器的快速，無標記檢測可卡因摻假樣品和生物體液，” 中國的美國化學學會 128（2006）：3138-3139。
23。中號米爾，M Vreeke，我的Katakis，“開發電化學凝血酶Aptasensor的不同的策略。” 電化學通訊（2006）：505-511。
24。中號利斯等，“一種基于核酸適配體的石英晶體蛋白質生物傳感器”，分析化學 74（2002）：4488-4495。
25。JA Hansen等人，“Quantum-Dot/Aptamer-Based超靈敏多分析物的電化學生物傳感器中，” [美國化學會志 128（2006）：2228至29年。
26。?Tombelli等，“基于核酸適體生物傳感器檢測HIV-1 TAT蛋白” 生物電化學 67（2005）：135-141。
27。RA Potyrailo等，“適應選擇核酸配體適體生物傳感器，” 分析化學 70（1998）：3419-3425。
28。?弗雷迪克森等人，“使用接近的依賴DNA連接檢測蛋白檢測，” 自然生物技術 20（2002）：473-477。
|
| 上一篇：適體被用來驗證的藥物靶標和屏幕的候選藥物 | 下一篇：改進的敏感性和特異性抗原表位的識別和增強 |
|---|
無法在這個位置找到： xy/left.htm