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		開發(fā)一種生物熒光檢測HIV病毒載量監(jiān)測

　　以下三種通用的方法是目前在發(fā)展中國家來檢測和量化HIVRNA的可供選擇：反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR），核酸序列的擴(kuò)增（NASBA），和支鏈DNA（的bDNA）。每一種方法需要三個步驟：樣品制備和病毒核酸的提取，從檢測對象的病毒RNA，并檢測和/或擴(kuò)增產(chǎn)物定量所產(chǎn)生的靶核酸序列或信號放大6RT-PCR使用反向轉(zhuǎn)錄酶轉(zhuǎn)化病毒RNA到互補(bǔ)DNA（cDNA），然后復(fù)制，因此可以被檢測到。在該方法中，RT-PCR定量HIVRNA，使測定病毒負(fù)荷。6是NASBA擴(kuò)增的等溫方法，其中，靶RNA是由3-酶系統(tǒng)放大，并通過競爭性共擴(kuò)增的控制量化。這種方法消除了對所使用用于RT-PCR的熱穩(wěn)定酶和熱循環(huán)儀器。-PCR），核酸序列擴(kuò)增（NASBA）和支鏈DNA（的bDNA）。對照品

　　RT-PCR使用逆轉(zhuǎn)錄酶酶病毒的RNA轉(zhuǎn)化為互補(bǔ)DNA（互補(bǔ)），然后復(fù)制，因此可以被檢測到在這種方法中，RT-PCR量化艾滋病毒的RNA，使病毒載量的決心,目前，以下四個市售的病毒載量檢測所有使用這些通用的方法之一：科瓦斯AmpliPrep和科瓦斯的TaqManV2.0由羅氏分子系統(tǒng)，實時HIV-1由Abbott實驗室，Versant的HIV-1RNA1.0試驗（KPCR）由西門子醫(yī)療診斷和的NucliSENSEasyQHIV-1v2.0順次生物梅里埃公司。4,6科瓦斯的TaqManHIV-1的COBASTaqMan探針的HIV-1檢測是一種體外核酸目前，以下四個商用病毒載量分析所有一般使用其中的一個方法：科瓦斯AmpliPrep和科瓦斯的TaqMan2.0羅氏分子系統(tǒng)，實時的HIV-1由雅培公司，熟練的HIV-1RNA的1.0測定（KPCR）西門子醫(yī)療診斷，和的NucliSENSEasyQHIV-1V2.0梅里埃。

　　擴(kuò)增檢測為HIV-1RNA在人類血漿中使用的COBASAmpliPrep儀自動試樣處理和自動化的擴(kuò)增和檢測的COBASTaqMan探針分析儀或科瓦斯的TaqMan48分析儀定量。這是一個完全自動化的，實時PCR系統(tǒng)為目標(biāo)的HIV基因組，從而導(dǎo)致檢測的下限雙方的插科打諢和LTR地區(qū)。6的COBASTaqMan探針HIV-1的檢測只需要一定的技術(shù)技能，具有較寬的動態(tài)范圍，是完全自動化（包括樣品轉(zhuǎn)移），并且只需要分析一個單間，但它也有一些缺點。為了進(jìn)行的COBASTaqMan探針的HIV-1檢測，一些專用的實驗室空間和設(shè)備是必需的，適度的技術(shù)支持是必不可少的。該設(shè)備也是昂貴的，通常是超出了任何發(fā)展中世界的設(shè)施，可提供空間和支持的范圍。6實時HIV-1。雅培實時HIV-1檢測采用實時熒光定量PCR，但不像TaqMan探針，它的目標(biāo)是在POLHIV基因組的整合區(qū)域。HIVRNA定量是使用m2000sp樣品制備和核酸的提取，并m2000rt用于擴(kuò)增和檢測的自動化流程。6雅培實時檢測的主要優(yōu)勢包括其高吞吐量，大動態(tài)范圍，而事實上，它可以是完全自動化的，封閉的系統(tǒng)中的PCR。此外，該設(shè)備可用于評估HIV之外的其他病原體。然而，與的COBASTaqMan探針，該系統(tǒng)需要專用的設(shè)備和空間，良好的技術(shù)支持，并有相當(dāng)?shù)馁Y金投入。6Versant的HIV-1RNA的1.0。的Versant的HIV-1RNA1.0試驗（的bDNA）是一種自動檢測該還針對HIV基因組的聚合酶整合區(qū)域，使用樣品準(zhǔn)備模塊和擴(kuò)增/檢測模塊一次。6的Versant的測定法也具有高吞吐量和可以完全自動化，從而降低污染的風(fēng)險較放大試驗定量的HIV-1RNA在人類血漿使用科瓦斯AmpliPrep儀器自動標(biāo)本處理和科瓦斯的TaqMan分析儀或科瓦斯的TaqMan48分析儀自動放大和檢測。

　　目前的商用實時HIV病毒載量測定的表一，主要特點。（點擊圖片放大。）表一，當(dāng)前商業(yè)實時HIV病毒載量的主要特征分析。（點擊圖片可放大）。PCR反應(yīng)。沒有特殊的實驗室設(shè)置，或單獨提取區(qū)域是需要的，并且該設(shè)備還可以用于評估其他病原體。然而，Versant的檢測的主要缺點包括需要熟練的技術(shù)人員，良好的技術(shù)支持和財政資源。6的NucliSENSEasyQ。的的NucliSENSEasyQHIV-1的2.0版使用NASBA為目標(biāo)的gag區(qū)擴(kuò)增艾滋病毒和定量核糖核酸（見表I）。該測定游NASBA與實時檢測通過使用利用的NucliSENSEasyQ分析儀分子信標(biāo)。9的的NucliSENSEasyQ分析提供高吞吐量的優(yōu)勢與需要的唯一介質(zhì)技能。它也是一個完全自動化的，封閉的系統(tǒng)。但是，它需要專門的空間和設(shè)備，并且有污染的高容量的實驗室危險。技術(shù)支持是必需的，增加了與此相關(guān)的試驗已經(jīng)很高的成本.

　　NucliSENSEasyQ分析提供高吞吐量的優(yōu)勢只有中等技能要求。這也是一個完全自動化的，封閉的系統(tǒng)，然而，它需要專用的空間和設(shè)備，有一個大容量實驗室的污染風(fēng)險。技術(shù)支持是必需的，已經(jīng)增加了高成本相關(guān)的分析。6

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