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| 細胞生產(chǎn)中進給速率對抗體的影響 | |||
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對抗體生產(chǎn)中加料速度的影響在生物反應器系統(tǒng)檢查。 上海生物反應器系統(tǒng)的效果進行了研究使用BR3530筒與METH7-4B6細胞株接種。
細胞的清除。 細胞清除的影響產(chǎn)生抗體和生物反應器運行長度決定在上海BR3530盒和PCP1.9D10細胞系。 哺乳動物細胞培養(yǎng)生長在hollow-fiber墨盒有一個有限的生命。 推測,積累細胞減少系統(tǒng)的生產(chǎn)力通過抑制整個hollow-fiber膜營養(yǎng)物質(zhì)的運輸,導致細胞死亡。 是否定期刪除多余的細胞生物反應器筒ECS將延長運轉(zhuǎn)周期和提高搖搖欲墜的運行參數(shù),如粗糖和抗體生產(chǎn)調(diào)查。
收獲方法。 抗體是收獲的ECS定期墨盒是接種后兩周內(nèi)開始。 兩種收獲模式被使用,都使用相同的設(shè)備。 在連續(xù)模式下的收獲,蠕動泵(Cole-Parmer,芝加哥)撤回了媒介的ECS緩慢,恒定速率(50 - 200毫升/天)。 同時同等體積的新鮮培養(yǎng)基被引入的ECS相同泵通過使用一個單獨的塊油管通過泵運行。 收獲瓶定期改變,及其內(nèi)容centrifuged g在1000 * 10分鐘去除細胞和碎片。 包含抗體的上清當時的存儲??20°C在測試之前。 第二個收獲模式是一個批處理方法:固定體積的介質(zhì)(50?250毫升)注入一次ECS,取代同等體積的antibody-rich室中。 這是每周兩到三次重復。 收成被以同樣的方式處理他們的連續(xù)模式。
結(jié)果
細胞生長和抗體生產(chǎn)。 鐵道部9 b1細胞系和BR3530盒,這是決定在兩個單獨的運行,平均19天被要求生產(chǎn)第一個克抗體。 這個細胞株在兩個實驗Acucell 1100盒需要31天生產(chǎn)1克的抗體(表1)。
類似的實驗進行VA1 18 d7細胞系。 的Clirans T220筒需要33天生產(chǎn)1 g的抗體,金額相當于10000兆瓦的另一盒(BR2010),這需要32天產(chǎn)生相同的金額。 但同樣VA1 18 d7細胞系生長在BR3530(30000 mw)生物反應器筒只需要17天生產(chǎn)1 g的抗體。 同樣,30000兆瓦生物反應器筒需要17天到達的目標電流的250毫克/人力資源,而所需的10000兆瓦的兩個墨盒31日和30天,分別達到這一水平。
類似的結(jié)果——13和26天,分別獲得了——與鐵道部9 b1細胞株BR3530 Acucell 1100墨盒。 的平均時間10000 mw -孔隙大小筒需要達到目標水平(1 g抗體生產(chǎn))是32天。 這與平均為30000 mw盒16天。 同樣,所需的平均時間10000 mw -孔隙大小筒達到250毫克/人力資源的目標電流的28天與18 BR3530盒。
抗體生產(chǎn)效率。 我們比較了每個hollow-fiber墨盒產(chǎn)生抗體的能力作為intracapillary介質(zhì)消耗的數(shù)量的函數(shù)由系統(tǒng)在實驗。 這些值被表示為毫克每升中等消費產(chǎn)生的抗體在整個運行。
使用鐵道部9 b1細胞系,我們確定最優(yōu)生產(chǎn)效率50 mg / L的BR3530墨盒和24 mg / L Acucell 1100盒。 VA1 18 d7細胞株生長在10000 mw墨盒有35毫克/升的生產(chǎn)效率Clirans T220 BR2010墨盒和30毫克/升。 然而,當相同的細胞系是生長在BR3530墨盒(30000 mw),效率增加到44 mg / L的介質(zhì)消耗。
比較的抗體生產(chǎn)BR3530 hollow-fiber筒,在72小時的靜態(tài)組織培養(yǎng)(表1)揭示了一個相關(guān)性的抗體的細胞株產(chǎn)生72小時文化和數(shù)量在30000 mw生產(chǎn)墨盒。
進給速率。 進給速率對抗體生產(chǎn)的影響在兩個實驗測量使用METH7-4B6-8C3.2.1細胞株生長在BR3530盒。 在第一個實驗中,intracapillary飼料率慢慢從0.5升/天增加到最多只有3.5 L /天(圖1)。在第二個實驗中,intracapillary飼料率增加更快從1 L /一天最多5.0升/天。 進給速率較低的運行產(chǎn)生抗體用更少的時間比送更高的運行速度(圖2)。在40天,生產(chǎn)效率的low-feed-rate實驗118 mg / L和high-feed-rate方案的生產(chǎn)效率是58毫克/ L(表1)。
抗體生產(chǎn)飼料率的影響以另外兩個實驗用鐵道部9 b1 F11 P1.1.1細胞株生長1100年Acucell墨盒使用Acusyst jr .)生物反應器系統(tǒng)。 進給速率開始的時候1 L /天,迅速加速到8.4升/天,運行的效率增加了只有9 mg / L(圖3和4)。進給速率較低的策略從0.6升/天,慢慢加速3.3升/天,生產(chǎn)效率幾乎增加了兩倍至24 mg / L(表1)。總抗體生產(chǎn)從每個運行大約是相同的。
細胞的清除。 當PCP1。 9 d10細胞株生長在上海生物反應器系統(tǒng)使用BR3530盒,只有25天后細胞達到融合。 然后抗體生產(chǎn)開始急劇下降(圖5)。30天開始,細胞從盒中取出每周兩次將注射器充滿IMDM(沒有的邊后衛(wèi))extracapillary港口和大力推動和拉動注射器的柱塞。 大量的細胞,細胞碎片和大量的抗體得到這個過程。
每個九cell-removal程序執(zhí)行后立即在實驗這一個生物反應器,抗體產(chǎn)量顯著增加。 粗糖也有相應的高程。 (圖5)。
批處理和連續(xù)的收成。 的收獲模式是如何影響總抗體生產(chǎn)? 收獲的批處理模式使用注射器或更快的泵的速度清除抗體。 當VA1 18 d7細胞株生長在上海系統(tǒng)切換從連續(xù)到批處理方式收獲,抗體的濃度從平均增加413到3387?g /毫升(圖6)。
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