細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒
在研究細(xì)胞時(shí)經(jīng)常要研究細(xì)胞的不同組份，而研究得最多的兩個(gè)細(xì)胞組份就是細(xì)胞核和細(xì)胞漿。分離細(xì)胞核蛋白和細(xì)胞漿蛋白，不僅可以用于研究蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位，而且很多時(shí)候分離出來的核蛋白可以用于轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面的研究，例如EMSA(也稱gel shift)，footprinting等。
細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一種比較簡單、方便的從培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織中抽提細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白的方法。約90分鐘就可以完成培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白的分離。抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，報(bào)告基因檢測(cè)以及酶活力測(cè)定等后續(xù)操作。
本試劑盒是通過細(xì)胞漿蛋白抽提試劑A和B，在低滲透壓條件下，使細(xì)胞充分膨脹，然后破壞細(xì)胞膜，釋放出細(xì)胞漿蛋白，然后通過離心得到細(xì)胞核沉淀。最后通過高鹽的細(xì)胞核蛋白抽提試劑抽提得到細(xì)胞核蛋白。
本試劑盒可以抽提100個(gè)樣品，如果每個(gè)樣品的數(shù)量為約二百萬細(xì)胞或約30-50毫克組織。
保存條件：
-20℃保存，一年有效。
注意事項(xiàng)：
需自備PMSF。PMSF一定要在抽提試劑加入到樣品中前2-3分鐘內(nèi)加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。PMSF(ST506)可以向北京萊耀訂購。
抽提蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
本試劑盒對(duì)于組織樣品，僅適合于新鮮組織，對(duì)凍存過的組織抽提效果很差。可以抽提的組織樣品數(shù)通常不足100個(gè)。
使用本試劑盒抽提到的細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白均可直接用北京萊耀生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)測(cè)定蛋白濃度。但不適合用Bradford法測(cè)定蛋白濃度。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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