細(xì)胞膜蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒
北京萊耀的細(xì)胞膜蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒(Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit)提供了一種比較簡單、方便地從培養(yǎng)細(xì)胞或組織中抽提細(xì)胞膜蛋白和細(xì)胞漿蛋白的方法。抽提的膜蛋白不僅包括質(zhì)膜上的膜蛋白，也包括線粒體膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜和高爾基體膜等上的膜蛋白。
本試劑盒通過勻漿適度破碎細(xì)胞，經(jīng)低速離心去除細(xì)胞核和少數(shù)未破碎的細(xì)胞產(chǎn)生的沉淀，隨后取上清高速離心獲得細(xì)胞膜沉淀和含有細(xì)胞漿蛋白的上清，然后通過優(yōu)化的膜蛋白抽提試劑從沉淀中抽提獲取膜蛋白。
約90分鐘即可完成培養(yǎng)細(xì)胞或組織的細(xì)胞膜蛋白與細(xì)胞漿蛋白的分離和抽提。抽提得到的蛋白可以用于SDS-PAGE，Western、酶活性測定等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
膜蛋白抽提試劑中含有蛋白酶抑制劑、磷酸酯酶抑制劑和EDTA等，后續(xù)不適合用于蛋白酶、磷酸酯酶等受這些抑制劑影響的酶的活性測定，但抽提獲得的膜蛋白或細(xì)胞漿蛋白適合用于檢測蛋白的磷酸化水平。
本試劑盒按照本說明書的操作步驟可以抽提100個(gè)細(xì)胞或組織樣品。
保存條件：
-20℃保存，一年有效。
注意事項(xiàng)：
需自備PMSF。PMSF一定要在抽提試劑加入到樣品中前2-3分鐘內(nèi)加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。PMSF(ST506)可以向北京萊耀訂購。使用本試劑盒抽提到的細(xì)胞膜蛋白與細(xì)胞漿蛋白均可直接用北京萊耀生產(chǎn)的BCA法蛋白濃度測定試劑盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)測定蛋白濃度。抽提獲得的細(xì)胞膜蛋白不適合用Bradford法測定蛋白濃度。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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